|
بررسی کارایی ژن‌های تنظیم‌کننده مسیرهای ترجمه و پس از ترجمه در بهینه‌سازی بیان فاکتور فعال‌کننده پلاسمینوژن بافتی
|
اعظم رحیم پور   ، آزیتا نجایی ، فریدون مهبودی |
|
|
|
چکیده: (4548 مشاهده) |
| سابقه و هدف: سلول‌های تخمدان
همستر چینی (CHO)پرکاربردترین سیستم میزبانی برای
بیان پروتئین‌های نوترکیب می‌باشند. روش‌های متنوعی هم‌چون ایجاد وکتورهای بیانی
بهینه و نیز میزبان‌های مهندسی شده برای افزایش میزان بیان پروتئین در این میزبان
به‌کار گرفته شده‌اند. در این مطالعه روش مهندسی سلول بر پایه ژن‌های موتان غیر
قابل فسفریله شونده زیر‌واحد آلفای فاکتور آغازی یوکاریوتی 2 (eIF2α S51A) و پروتئین انتقال‌دهنده سرامید (CERT S132A)، که به ترتیب مسیرهای ترجمه و ترشح پروتئین
را در سلول کنترل می‌کنند، به منظور ایجاد رده سلولی CHO بهینه به‌کار گرفته شده است. مواد و روش‌ها: هر یک از
ژن‌های CERT S132A، eIF2α S51A
و فاکتور فعال‌کننده پلاسمینوژن بافتی
(t-PA)
در وکتور بیانی مناسب کلون شدند. جمعیت‌های سلولی پایدار بیان‌کننده هر یک از
ژن‌های CERT S132A و eIF2α S51A
ایجاد شده و کارایی این سلول‌ها در بیان موقتی ژن t-PA در مقایسه با سلول‌های دستورزی نشده مورد بررسی قرار گرفت. یافته‌ها: وارد شدن هر یک از ژن‌های CERT
S132A و eIF2α S51A
در ژنوم سلول میزبان از طریق انجام PCR بر DNA
ژنومی سلول‌های پایدار تائید شد. هم‌چنین در وسترن‌بلات باند اختصاصی مطابق با هر یک
از پروتئین‌های CERT S132A و eIF2αS51A
مشاهده شد. بیان ژن CERT S132A افزایش بیان 50% را در بیان t-PA
به‌دنبال داشت. در مقابل در سلول‌های پایدار شده با ژن eIF2α S51A
تاثیر مثبتی بر میزان بیان مشاهده نشد. نتیجه‌گیری: نتایج این تحقیق
کارایی روش مهندسی سلول بر پایه ژن CERT S132A را در ایجاد سلول CHO بهینه‌شده نشان
می‌دهد. |
|
| واژه‌های کلیدی: سلول‌های تخمدان هامستر چینی، سرامید، فاکتور آغازی یوکاریوتی 2، فعال‌کننده پلاسمینوژن بافتی |
|
|
متن کامل [PDF 846 kb]
(1204 دریافت)
|
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
عمومى
دریافت: 1394/5/19 | پذیرش: 1394/6/16 | انتشار: 1394/7/4
|
|
|
|
|
|
|
| ارسال پیام به نویسنده مسئول |
|
|
|
| ارسال نظر درباره این مقاله |
|
|
|
