|
ساخت سویه بیانی پیکیا پاستوریس مولد قطعه‌ی تک‌زنجیره‌ای ناحیه‌ی متغیر آنتی‌بادی علیه ناحیه خارج سلولی EpCAM
|
فاطمه محمد قلیزاد   ، عطیه هاشمی  |
|
|
|
چکیده: (3213 مشاهده) |
| هدف: مولکول چسباننده سلول‌های اپیتلیال (EpCAM) در سطح سلول‌های توموری اپیتلیال به طور فزاینده‌ای بیان می‌شود. بنابراین EpCAM یک آنتی‌ژن با ارزش در درمان هدفمند محسوب می‌شود. استفاده از آنتی‌بادی‌های منوکلونال رویکردی جذاب در درمان هدفمند سرطان است. محدودیت‌های آنتی‌بادی‌های منوکلونال نظیر اندازه‌ی بزرگ منجر به توسعه قطعات تک‌زنجیره‌ای ناحیه متغیر آنتی‌بادی (scfv) شد. پیکیا پاستوریس به علت انجام فرایندهای پس از ترجمه و قیمت ارزان به عنوان میزبانی مناسب در بیان پروتئین‌های نوترکیب در مقیاس بالا مورد توجه است. در این مطالعه، پیکیا پاستوریس بیان‌کننده scfv علیه قسمت خارج سلولی (EpEX) EpCAM ساخته شد.
مواد و روش‌ها: ژن بهینه شده‌ی کدونی مولد پروتئین anti-EpEX-scfv در سایت‌های آنزیمی XhoI و XbaI وکتور pPICZαB وارد شد. صحت سازه نوترکیب به کمک توالی‌یابی و آنالیز آنزیمی تأیید شد. سازه نوترکیب با کمک الکتروپوراسیون در سویه GS115 وارد شد. کلون‌های مثبت با کمک PCR و با به‌کارگیری سه جفت پرایمر ارزیابی شدند.
یافته‌ها: صحت سازه نوترکیب با استفاده از آنزیم‌های HindIII وBamHI (باندهای 2788 و 1537 جفت باز) هم‌چنین XhoI و XbaI (باندهای 3506 و 819 جفت باز) تأیید شد. کلون‌های نوترکیب با کمک PCR با مشاهده دو باند (2200 و 1321 جفت باز) زمانی‌که دو پرایمر AOX استفاده شد، هم‌چنین یک باند (968 جفت باز) زمانی‌که پرایمر AOX و پرایمر اختصاصی ژن استفاده شد، تأیید شد. هنگامی‌که دو پرایمر اختصاصی ژن به‌کار گرفته شد، یک باند (751 جفت باز) مشاهده شد.
نتیجه‌گیری: این یافته‌ها ساخت سویه مهندسی شده را تأیید می‌کند. پروتئین anti-EpEX-scfv می‌تواند انتخابی مناسب در زمینه‌ی ایمنی‌درمانی سرطان باشد.
|
|
| واژه‌های کلیدی: پیکیا پاستوریس، anti-EpEX-scfv، آنتی‌بادی منوکلونال، EpCAM، ایمنی درمانی سرطان |
|
|
متن کامل [PDF 2558 kb]
(1013 دریافت)
|
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
عمومى
دریافت: 1397/6/11 | پذیرش: 1397/12/13 | انتشار: 1398/8/7
|
|
|
|
|
|
