|
تولید موش ناک اوت Spata19 با استفاده از فناوری CRISPR/Cas9
|
مهسا زرگر    ، عباس جمشیدی زاد ، آیدین رحیم طایفه ، احسان هاشمی ، علی نجفی ، مهدی شمس آرا ، محمد حسین مدرسی |
|
|
|
چکیده: (4097 مشاهده) |
| هدف: ژن SPATA19 در مراحل تکوینی بیضه و برخی ارگان‌ها بیان دارد، ولی تاکنون عملکرد آن فقط در بیضه بررسی شده است. در این مطالعه با بهره‌گیری از روش CRISPR/Cas9 nickase ضمن تولید موش ناک اوت Spata19 برای مطالعات بعدی در سایر ارگان‌ها، مسیری موثر برای تولید این موش‌ها ارائه دادیم.
مواد و روش‌ها: با استفاده از وکتور pX335 و gRNAهای طراحی شده، پلاسمیدهای CRISPR/Cas9 nickase سنتز شدند. هر کدام از پلاسمیدها به باکتری E.coli ترانسفورم شدند و انتخاب کلونال انجام شد. پس از استخراج پلاسمیدها از باکتری، به نسبت مساوی با یکدیگر ترکیب شدند. مخلوط حاصل به پیش هسته‌ی نر تزریق شد. زیگوت حامل پلاسمید به اویداکت موش فاستر منتقل شد. پس از طی دوران بارداری موش‌های متولد شده مورد آنالیز قرار گرفتند.
یافته‌ها: با استفاده از روش CRISPR/Cas9 nickase موش‌های ناک اوت با حذف 2 نوکلئوتیدی ایجاد کردیم. این حذف در سه سطح DNA، RNA و پروتئین مورد بررسی قرار گرفت. حذف 2 نوکلئوتیدی در سطح DNA و RNA به وسیله توالی‌یابی تایید شد. با ترجمه‌ی توالی RNA جهش یافته مشخص شده که این حذف کدون خاتمه زودرس ایجاد می‌کند. در بررسی فنوتیپی نیز عقیم بودن موش‌های هموزیگوت نر (Spata19-/-) تایید شد.
نتیجه‌گیری: با تولید موش‌های ناک اوت Spata19 ما یک پروتکل برای تولید موش‌های ناک اوت ارائه می‌دهیم. این موش‌ها می‌تواند به عنوان موش‌های نابارور و برای بررسی ویژگی‌های بیش‌تر ژن Spata19 به کار گرفته شود.
|
|
| واژه‌های کلیدی: ناک اوت، Spata19، CRISPR/Cas9 nickase، موش، اسپرم، pX335 |
|
|
متن کامل [PDF 1073 kb]
(1425 دریافت)
|
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
عمومى
دریافت: 1398/4/8 | پذیرش: 1398/11/1 | انتشار: 1399/2/24
|
|
|
|
|
|
