|
ساخت سویه بیانی مخمر نوترکیب مولد EpEX به‌عنوان انتخابی مناسب در تشخیص و درمان سرطان
|
مژده زمانی   ، عطیه هاشمی  ، نجمه زارع ، هدی جهاندار |
|
|
|
چکیده: (3085 مشاهده) |
| هدف: مولکول چسبان سلول اپیتلیال (EpCAM) یک گلیکوپروتئین غشایی است که بیان آن در اکثر تومورهای با منشأ اپیتلیالی افزایش می‌یابد و لذا می‌تواند در شناسایی و درمان سرطان‌ها با کمک روش‌های ایمونولوژیکی به‌عنوان یک هدف مناسب به‌کار گرفته شود. لذا تولید نوترکیب این پروتئین به فرم طبیعی حایز اهمیت می‌باشد. در دو دهه‌ی گذشته مخمر پیکیا پاستوریس به‌دلیل دارا بودن مزایای هر دو سیستم بیانی پستاندار و پروکاریوتی، به‌عنوان میزبان رایج در تولید پروتئین‌های نوترکیب مطرح بوده است. در این مطالعه پیکیا بیان‌کننده بخش خارج سلولی EpCAM ساخته شده است.
مواد و روش‌ها: ژن بهینه شده‌ی کدونی مولد پروتئین EpEX در محل‌های برشی آنزیم‌های XhoI و XbaI وکتور pPICZαB همسانه‌سازی شد. سازه نوترکیب با کمک الکتروپوراسیون در سویه GS115 وارد شد. کلون‌های مثبت با کمک PCR و با استفاده از جفت پرایمر مربوط به ژن AOX1 ارزیابی شدند.
یافته‌ها: صحت ساخت سازه نوترکیب pPICZαB-EpEX با استفاده از توالی‌یابی و آنالیز آنزیمی با استفاده از آنزیم‌های XhoI و XbaI (باندهای 3506 و 843 جفت باز) هم‌چنینBamHI (باندهای 3651 و 698 جفت باز) تأیید شد. نتایج حاصل از غربالگری بر پایه PCR، زمانی‌که دو پرایمر مربوط به ژن AOX1 به‌کار گرفته شد، نشان‌دهنده‌ی حضور دو باند (2200 و 1345 جفت باز) در کلون‌های نوترکیب بود.
نتیجه‌گیری: ساخت سویه مهندسی شده مولد EpEX در این مطالعه تأیید شد. از این سویه ساخته شده می‌توان در تولید پروتئین نوترکیب EpEX جهت اهداف تشخیصی و درمانی استفاده کرد
|
|
| واژه‌های کلیدی: پیکیا پاستوریس، همسانه سازی مولکولی، EpEX، Epithelial cell adhesion molecule، سرطان |
|
|
متن کامل [PDF 2718 kb]
(980 دریافت)
|
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
عمومى
دریافت: 1397/11/29 | پذیرش: 1398/2/14 | انتشار: 1398/8/7
|
|
|
|
|
|
|
| ارسال پیام به نویسنده مسئول |
|
|
|
| ارسال نظر درباره این مقاله |
|
|
|
