|
کلونینگ،بیان، تخلیص و بررسی فعالیت ضد استافیلوکوکی پروتئین لیزوستافین اولیه در شرایط آزمایشگاهی
|
| لیلا فرهنگ نیا، احسان الله غزنوی راد، ندا مولایی، حمید ابطحی* |
|
|
|
چکیده: (6679 مشاهده) |
| سابقه
و هدف: استافیلوکوک اورئوس عامل طیف وسیعی از عفونت‌ها،از عفونت‌های پوستی تا
انتشار آن وعفونت‌های سیستمیک منجر‌شونده به نارسایی ارگانی ومرگ می‌باشد.مقاومت
دارویی در این گروه از پاتوژن‌ها یک نگرانی جهانی شده و نیازمند توسعه‌ی عوامل
درمانی جدیداست. لیزوستافینیک نمونه از این عوامل می‌باشد،لیزوستافینیک باکتریوسین
تولید‌شده به‌وسیله‌ی استافیلوکوک سیمولانس است که باعث کشتن سلول‌های استافیلوکوک
اورئوس از طریق تخریب دیواره سلولی استافیلوکوک می‌شود.هدف از این مطالعه،بیان
بالای لیزوستافین اولیه به شکل نوترکیب وبررسی فعالیت ضد استافیلوکوکی آن بر علیه
استافیلوکوک اورئوس تحت شرایط آزمایشگاهی می‌باشد. مواد
و روش‌ها: در این مطالعه،ژن لیزوستافین از استافیلوکوک سیمولانس
پس از تکثیر با استفاده از واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) در ناقل پلاسمیدی pET32a کلون وبیان شد. پروتئین بیان شده
توسط کیتNi-NTA بر اساس
کروماتوگرافی تمایلی تخلیص شد.فعایت آنتی‌باکتریال آن بر علیهیک سوسپانسیون سلولی
از استافیلوکوک اورئوس با استفاده از روش کدورت‌سنجی مطالعه شد. یافته‌ها:نتایجPCR وتعیین توالی نشان داد که ژن هدف به درستی در ناقل مورد نظر کلون
شده است. بیان پروتئین به‌وسیلهIPTG القا شد و غلظت‌های بالایی از پروتئین نوترکیب توسط رزین نیکل با
فعالیت ضد استافیلوکوکی تخلیص شد. نتیجه‌گیری:pET32aیک سیستم بیانی کارآمد در بیان پروتئین نوترکیب پیش‌ساز
لیزوستافین در میزبان بیانیE.coli می‌باشد |
|
| واژه‌های کلیدی: استافیلوکوک طلایی، لیزوستافین، کلونینگ مولکولی |
|
|
متن کامل [PDF 521 kb]
(1803 دریافت)
|
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
عمومى
دریافت: 1392/4/25 | پذیرش: 1392/9/26 | انتشار: 1393/3/21
|
|
|
|
|
|
