|
ساخت وکتور بیانی pcDNA3.1-FSHβ به منظور انتقال ژن زیرواحد FSHβ به سلول لاین پستانداران
|
رضا نصر   ، محمد رضا اکبری عیدگاهی ، آذر سادات رضاپور جوارشک ، احمد رضا بندگی ، سعید ولی زاده |
|
|
|
چکیده: (11622 مشاهده) |
| سابقه
و هدف: هورمون محرک فولیکولی (Follicle stimulating
hormone, FSH)، یکی از هورمون‌های گلیکوپروتئینی هیپوفیز است که از دو زیرواحد
آلفا و بتا تشکیل شده است. زیرواحد بتا حاوی 111 اسیدآمینه و یک سیگنال پپتید 18
اسیدآمینه‌ای و مسئول فعالیت بیولوژیکی هورمون می‌باشد. هدف از این مطالعه ساخت
وکتور بیانی pcDNA3.1-FSHβ به منظور
انتقال ژن زیرواحد FSHβ به سلول
لاین پستانداران بود. مواد
و روش‌ها: ابتدا یک جفت پرایمر برای ساب‌کلونینگ زنجیره β از T.vector طراحی گردید تا علاوه بر داشتن نواحی
ابتدا و انتهای ژن زنجیره β دارای
محل اثر آنزیم‌های HindΙΙΙ و EcoRΙ باشد. زنجیره بتای آمپلیفیه شده از
ناحیه جای‌گاه دو آنزیم فوق در پلاسمید pcDNA3.1 کلون و پلاسمید نوترکیب به وسیله
ترانسفورماسیون وارد سلول E.coli گردید.
کلون‌های تشکیل‌شده به وسیله PCR مجدد
بررسی و پلاسمید تعدادی از کلون‌های مثبت تخلیص گردید. صحت پلاسمیدهای خالص شده به
دو روش هضم آنزیمی و تعیین توالی تأیید گردید. یافته‌ها: آنالیز آنزیمی و تعیین توالی نشان داد که پلاسمید pcDNA3.1-F390β دارای ساختار پلاسمیدی و توالی ژنی
صحیح است و تطابق کامل با ژن بتای هورمون FSH گزارش شده در GenBank دارد. نتیجه‌گیری: این پلاسمید نوترکیب به لحاظ ساختاری صحیح و
جهت انتقال ژن به سلول کشت پستانداران و ارزیابی بیان مناسب می‌باشد. |
|
| واژه‌های کلیدی: هورمون محرکه فولیکولی، زیر واحد بتا، کلونینگ، سلول لاین پستانداران |
|
|
متن کامل [PDF 342 kb]
(2633 دریافت)
|
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
عمومى
دریافت: 1390/12/2 | پذیرش: 1392/6/13 | انتشار: 1392/6/13
|
|
|
|
|
|
