|
تولید موش ترانس‌ژنیک واجد ترانس‌ژن بتالاکتوگلبولین- کلسی‌تونین
|
احمدرضا نیاورانی   ، سمیه دهقانی‌زاده ، محسن کریمی ، سیروس زینلی |
|
|
|
چکیده: (14541 مشاهده) |
| سابقه و هدف: بیان پروتئین‌های خارجی در شیر پستانداران یکی از راه‌کارهایی است که به تدریج کاربرد وسیعی در تولید انبوه فرآورده‌های دارویی نوترکیب می‌یابد، به‌ویژه فرآورده‌هایی که دست‌خوش بیش‌ترین تغییرات پس از ترجمه‌ای می‌شوند. هدف از این تحقیق ایجاد موش‌های ترانس‌ژنیکی بود که واجد ترانس‌ژن بیان‌کننده کلسی‌تونین هیبرید در غدد شیری موش باشند.
مواد و روش‌ها: در این تحقیق از یک پروموتر اختصاصی شیر به نام بتالاکتوگلبولین گوسفندی (oBLG) برای القای بیان کلسی‌تونین هیبرید نوترکیب در شیر موش استفاده شد. بر این اساس، یک سازه ژنی متشکل از 7/10 کیلوباز از ژن oBLG شامل پروموتر و ناحیه پایین دست ژن ساخته شد و توالی کدکننده کلسی‌تونین در چارچوب ترجمه اگزون پنجم oBLG قرار داده شد. سازه ژنی کلون شده پس از تخلیص روی شیب سزیم کلراید، از ناقل خود آزاد شد و به وسیله ژل آگارز تخلیص گردید و با فیلتراسیون و رقیق سازی آماده استفاده شد. آن‌گاه سازه ژنی مزبور به کمک میکرومانیپولاتور در تخمک‌های تازه بارور موش تزریق شد و سلول‌های زنده مانده از این تزریقات، به لوله رحمی موش‌هایی با آبستنی کاذب بازگردانده شدند. حاصل این انتقال زیگوت‌های تزریق شده 41 موش بود که ژنوتیپ آن‌ها با استفاده از PCR، اسلات بلات و ساترن بلات تعیین گردید.
یافته‌ها: نتایج تعیین ژنوتیپ با PCR نشان داد که 9 موش از نظر وجود ترانس‌ژن مثبت هستند، در حالی که تنها 4 موش بلات مثبت داشتند. 3 موش نر و 3 موش ماده، ترانس‌ژن را به نسل بعدی، یعنی نسل اول موش‌های ترانس‌ژنیک انتقال دادند. موش‌های نسل اول به بعد نیز ترانس‌ژن را به صورت پایا و تابع قواعد مندلی به نسل دوم انتقال دادند.
نتیجه‌گیری: با توجه به این که 6 موش از 9 موش مزبور توانستند ترانس‌ژن را حداقل به یکی از موش‌های نسل بعدی خویش انتقال دهند، این 6 موش را می‌توان بانی‌های (Founders) مستقل ترانس‌ژنیک و سردسته خانواده‌های ترانس‌ژنیک مزبور در نظر گرفت. |
|
| واژه‌های کلیدی: موش ترانس‌ژنیک، شیر، بتا لاکتوگلبولین، کلسی‌تونین، پروتئین نوترکیب، پروتئین ترکیبی |
|
|
متن کامل [PDF 350 kb]
(3673 دریافت)
|
نوع مطالعه: كاربردي |
موضوع مقاله:
عمومى
دریافت: 1387/6/20 | انتشار: 1384/2/25
|
|
|
|
|
|
