|
کلون‌کردن ژن آنتی‌ژن ایمنی‌بخشBacillus anthracis در Bacillus subtilis
|
مجید مقبلی   ، فریدون ملک‌زاده ، سیروس زینلی ، کاظم پریور ، مهناز مظاهری‌اسدی |
|
|
|
چکیده: (14845 مشاهده) |
| سابقه و هدف: آنتی‌ژن ایمنی‌بخش(PA) (Protective antigen) Bacillus anthracis به‌عنوان واکسن سیاه زخم مورد استفاده قرار می‌گیرد. کلون و بیان ژن PA در سویه‌های مختلف گزارش شده است که بیش‌ترین بیان، در B. subtilis تا μg/ml 160 بوده است. هدف از این تحقیق کلون کردن ژن PA در ناقل بیان‌کننده pWB980 و انتقال آن به B. subtilis سویه WB600 می‌باشد.
مواد و روش‌ها: در این مطالعه پلاسمید pXO1 از B. anthracis سویه Stern با روش قلیا جدا و ترادف بازی kb 4/2 ژن با استفاده از PCR تکثیر گردید. قطعه تکثیر یافته به‌طور مستقیم بر روی ناقل pTZ57R کلون و با استفاده از روش CaCl2 به E.coli سویه DH5α انتقال یافت. سپس ژن با آنزیم‌های SalI و KpnIاز روی T-Vector جدا گردید. واکنش اتصال بین قطعه ژن خالص شده PA و ناقل pWB980 گذاشته شد و سپس با روش Electroporation در V 1000 به B. subtilis منتقل شد.
یافته‌ها: در این تحقیق توانستیم ژن PA را به‌وسیله PCR از B. anthracis سویه Stern جدا و ابتدا در پلاسمید pTZ57R کلون کرده و وجود ژن با تجزیه و تحلیل آنزیمی، واکنش PCR و تعیین ترادف بازی (Sequencing) تأیید گردید. سپس ژن بر روی ناقل بیان‌کننده pWB980 و در B. subtilis کلون و وجود ژن در دو کلنی مقاوم به کانامایسین AMN1 و AMN3 با استفاده از تجزیه و تحلیل آنزیمی و واکنش PCR تأیید گردید.
نتیجه‌گیری: در این تحقیق با تغییر در روش‌های مورد استفاده و استفاده از ناقل بیان‌کننده pWB980 توانستیم ژن PA را درB. subtilis کلون کنیم. این ژن برای اولین بار در ایران جدا و کلون شده است؛ هم‌چنین این تحقیق اولین کار کلون کردن ژن در میزبان B. subtilis در ایران می‌باشد. |
|
| واژه‌های کلیدی: Bacillus subtilis، Bacillus anthracis، کلون کردن، آنتی‌ژن ایمنی‌بخش، pWB980، سیاه زخم |
|
|
متن کامل [PDF 366 kb]
(3262 دریافت)
|
نوع مطالعه: كاربردي |
موضوع مقاله:
عمومى
دریافت: 1387/6/20 | انتشار: 1384/2/25
|
|
|
|
|
|
|
| ارسال پیام به نویسنده مسئول |
|
|
|
| ارسال نظر درباره این مقاله |
|
|
|
