|
کلونینگ و تولید فرم مونومر استرپتاویدین نوترکیب و ارزیابی اتصال آن به بیوتین
|
الهام دیده ورا   ، عبدالرحیم صادقی ، حمید ابطحی |
|
|
|
چکیده: (4754 مشاهده) |
| هدف: استرپتاویدین پروتئینی هموتترامر است که تمایل اتصال بالای آن به بیوتین باعث شده در فرآیندهای بیوتکنولوژی و مطالعات سلولی کاربرد فراوانی داشته باشد. اما فرم تترامر آن در بعضی تداخل ایجاد می‌کند. بنابراین در این مطالعه با ایجاد جهش حذفی اقدام به تولید فرم مونومر استرپتاویدین گردید.
مواد و روش‌ها: ابتدا توالی نوکلئوتیدی استرپتاویدین از سایت NCBI گرفته شد و بعد از اعمال جهش در توالی ژن مورد نظر به منظور بیان در باکتری E.coli بهینه و سنتز گردید. برای کلون کردن ژن از سویه E.coli DH5α و برای بیان ژن استرپتاویدین از سویه E.coli BL21 (DE3) pLysS استفاده شد. تخلیص پروتئین با کیت
Ni-NTA انجام شد و توسط HABA dye تمایل اتصال استرپتاویدین به بیوتین مورد سنجش قرار گرفت.
یافته‌ها: فرم مونومر استرپتاویدین در میزبان بیانی E.coli BL21 (DE3) pLysS تولید و تخلیص گردید. استرپتاویدین مونومر نوترکیب دارای تمایل اتصال مناسب به بیوتین بود.
نتیجه‌گیری: با ایجاد جهش در توالی پپتیدی استرپتاویدین می‌توان به فرم مونومر آن دست یافت که دارای تمایل اتصال مناسب به بیوتین باشد. |
|
| واژه‌های کلیدی: استرپتاویدین، همانند سازی مولکولی، اشریشیا کلی |
|
|
متن کامل [PDF 746 kb]
(1794 دریافت)
|
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
عمومى
دریافت: 1395/10/27 | پذیرش: 1396/8/24 | انتشار: 1396/10/11
|
|
|
|
|
|
|
| ارسال پیام به نویسنده مسئول |
|
|
|
| ارسال نظر درباره این مقاله |
|
|
|
